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European Journal of Scientific Research ISSN 1450-216X Vol.36 No.3 (2009), pp 357-362 EuroJournals Publishing, Inc. 2009 http://www.eurojournals.com/ejsr.htm Mise en Évidence De Résidus d’Antibiotiques Dans le Lait de
Vache Produit Dans l’Algérois
Meriem-Hind Ben-Mahdi
Ecole Nationale Supérieure Vétérinaire d’Alger BP 161 Hacène Badi, El Harrach, Alger, Algérie Sabrine Ouslimani
Ecole Nationale Supérieure Vétérinaire d’Alger BP 161 Hacène Badi, El Harrach, Alger, Algérie Abstract
La présence de résidus d’antibiotiques outre les risques directs ou indirects relativement modérés qu’ils présentent pour le consommateur, peut se révéler un véritable fléau pour l’industrie de transformation du lait en produits laitiers. En effet, ces résidus peuvent être à l’origine de l’inhibition totale ou partielle des phénomènes fermentaires d’origine bactérienne La présente étude a eu pour objectif la recherche de résidus d’antibiotiques dans le lait crus produit dans l’Algérois. Au total, 760 échantillons de lait ont été collectés sur les deux wilayas d’Alger et de Boumerdes. Un premier screening des échantillons a été réalisé par le test d’acidification suivi par une épreuve de confirmation de diffusion en gélose. Les résultats obtenus ont montré une contamination de 9,87 % des laits testés. Les résidus de pénicilline et/ou tétracyclines étaient à l’origine de la contamination de 97,33 % des échantillons de laits positifs alors que les résidus de macrolides et / ou d’aminosides n’ont été détectés que dans 2,67 % des prélèvements testés positifs. Les résultats obtenus soulignent l’impérieuse nécessité de la mise en place d’un contrôle systématique du lait cru produit en Algérie.
Keywords: Lait cru, Résidus d’antibiotique, Contrôle, Méthode microbiologique,

1. Introduction
Produit vivant et fragile, le lait doit répondre à des normes drastiques, afin d'assurer une qualité
irréprochable tant sur le plan microbiologique que toxicologique. Un lait destiné à la consommation
humaine se doit par conséquent d’être exempt de tout type de contamination et tout particulièrement
médicamenteuse. Malheureusement, l’usage croissant et souvent irraisonné de produits antibiotiques se
solde très souvent par la présence de leurs résidus dans le lait produit par la vache traitée. La présence
de résidus d’antibiotiques dans le lait peut parfois constituer un danger pour le consommateur en
déclenchant dans de rares cas accidents allergiques (Dewdney et al, 1991), toxiques (Perry et al,, 1967;
Pawelczak et al, 2002) ou encore en favorisant l’émergence d’une microflore multi-résistante; mais
également et, surtout être à l’origine de perturbations importantes des processus de fermentation et de
maturation des produits laitiers de large consommation tels que yaourts, fromages et autres laits
Mise en Évidence De Résidus d’Antibiotiques Dans le Lait de Vache Produit Dans l’Algérois fermentés (Wright and Harold, 1960; Mitchell et al,, 1998). De nombreuses méthodes permettent la détection et, dans certains cas, l’identification précise des molécules antibiotiques présentes dans le lait. Elles diffèrent par leur sensibilité, leur cout et les difficultés techniques inhérentes à leur réalisation. Certaines comme l’HPLC (High Performance Liquid Chromatrography) ou la LC-MS (Liquid Chromatography-Mass Spectrometry) (Kennedy et al, 1998; Aguilera-Luiz et al, 2008) permettent outre une identification précise de la molécule en cause, une quantification fine de celle-ci. D’autres méthodes microbiologiques essentiellement basées sur le ralentissement ou l’inhibition de la croissance d’une souche bactérienne sensible mise en présence de l’échantillon de lait à tester (Galesloot and Hassing, 1962 ; Jurdy and Asmar, 1981) ont permis le développement de kits rapides de détection (Delvotest®, Copan Test®, Charm Farm Test®…) plus adaptés au contrôle laitier de masse (Nows, 1995; Mitchell et al, 1998; Suhren, 1998). Différentes méthodes permettent un assainissement du lait en éliminant les résidus d’antibiotiques : le traitement thermique du lait permettrait uniquement l’élimination d’une partie
seulement des résidus dans la mesure où tous les antibiotiques ne présentent pas la même
thermolabilité (Pilet and Toma, 1969; Hassani et al, 2008). De plus ce procédé de chauffage du lait
implique d’une part, une montée en température supérieure à celle mise en œuvre au cours de la
pasteurisation ou de la stérilisation du lait et d’autre part, un prix de revient élevé et une modification
des propriétés technologiques du lait. L’utilisation de pénicillinase a été également étudiée, mais elle
ne se révèle efficace que sur les résidus de pénicillines et reste extrêmement onéreuse. Par conséquent,
une solution acceptable nécessiterait la mise en place d’un système de contrôle régulier pour ne pas
dire systématique du lait destiné à l’industrie de transformation.
En Algérie, les informations relatives à l’importance de la contamination du lait cru par les résidus d’antibiotiques restent extrêmement limitées. Aussi, l’objectif de cette présente étude a été la
recherche de résidus d’antibiotiques dans le lait cru produit dans l’Algérois, au niveau de deux wilayas
en particulier : Alger et Boumerdes. Pour ce faire, 760 échantillons de lait ont été analysés par deux
techniques microbiologiques distinctes : un test d’acidification et une épreuve de confirmation par
diffusion en gélose.
2. Matériel et Méthodes
2.1. Localisation de l’expérimentation et conditions de prélèvement du lait
Cette étude a porté sur un total de 760 prélèvements de lait cru collectés sur deux wilayas du centre
nord de l’Algérie : Alger et Boumerdes (tableau 1).
Tableau 1: Répartition de des prélèvements de lait entre les deux wilayas étudiées
Boumerdes Total
L’ensemble des échantillons de lait prélevés provenait de vaches déclarées saines par l’éleveur et n’ayant subi aucun traitement antibiotique depuis au moins un mois. Le lait produit par ces vaches était destiné à la consommation humaine soit en l’état soit après transformation. Deux prélèvements de lait de 40 ml ont été réalisés par vache dans des flacons plastiques stériles et étanches, clairement étiquetés et identifiés. Les échantillons ont été transportés dans une glacière avant d’être congelés dans les 2 heures suivant leur prélèvement. Avant d’être testés, tous les échantillons ont été chauffés à 80°C pendant 5 minutes afin d’inactiver les substances inhibitrices (lysozymes) naturellement présentes dans le lait (Vermunt et al, 1993). Meriem-Hind Ben-Mahdi and Sabrine Ouslimani 2.2. Méthode
La recherche de résidus d’antibiotiques dans les prélèvements collectés a été effectuée selon la
méthode officielle européenne de détection des résidus d’antibiotiques dans le lait (Décision de la
commission 91/180/CEE du 14 février 1991) et, qui est appliquée dans la communauté européenne
depuis le 1er janvier 2002 (Décision européenne 91/180.CEE ; Règlement CE N°1664/2006). Deux
techniques ont été successivement mises en œuvre : Un test d’acidification qui repose sur la mise en
évidence d’une éventuelle inhibition de Bacillus stearothermophilus var. calidolactis C953 (souche
C953, CIP 5281), indiquée par le virage d’un indicateur coloré par les résidus d’antibiotiques qui
seraient présents dans l’échantillon. Suivi par une épreuve de confirmation, correspondant à la
réalisation de deux tests de diffusion en gélose l’un avec Bacillus subtilis (ATCC 6633, suspension de
spores France 2612 AO) à 30°C et l’autre avec Bacillus stearothermophilus variété calidolactis à
55°C.
2.2.1. Test d’acidification
L’échantillon de lait est ensemencé de spores de B. stearothermophilus dans un milieu gélosé nutritif
peptonné, comprenant du pourpre de bromocrésol et du triméthoprime (Sigma Chemical Co., St. Louis,
MO, USA), pendant 2 h 30 à 64°C. Un témoin négatif (lait en poudre reconstitué certifié exempt de
résidus d’antibiotiques, Merck) et un témoin positif (lait contenant 0,01 UI/ml de pénicilline témoin,
Sigma Chemical Co., St. Louis, USA) sont mis à incuber en présence de 0,1 ml de la culture d’épreuve
dans les mêmes conditions et en même temps que les échantillons à tester.
2.2.2. Méthode de diffusion en gélose
Le milieu gélose Muller Hinton (Institut Pasteur d’Algérie) préalablement fondu à 100°C et refroidi à
55°C est coulé dans des boites Pétri. Le milieu a été ensuite inoculé avec des spores de B. subtilis et de
B. stearothermophilus à raison de 103 et 105 spores /ml. Les disques de papier filtre stériles, imprégnés
du lait à tester par capillarité ont été ensuite déposés à la surface de la gélose et les boites Pétri ont été
mises à incuber à 55°C (B. stearothermophilus) et 30°C (B. subtilis). Après 24 h d’incubation les
diamètres des zones d’inhibition ont été mesurés grâce à un pied à coulisse ((Digimatic, Mitutoyo Ltd,
Ede, Pays Bas).
Les différentes familles d’antibiotiques détectées par l’inhibition de chacun des microorganismes test sont reprises dans le tableau 2.
Tableau 2: Familles d’antibiotiques détectées par B. stearothermophilus et B. subtilis lors de l’épreuve de
Microorganisme test
Antibiotique recherché
Erythromycine Streptomycine Aminosides Pénicilline G
3. Résultats
3.1. Résultats du Test d’Acidification
La persistance de la couleur pourpre du bleu de bromocrésol a été constatée pour 73 échantillons sur les 760 testés (9,60 %), traduisant la présence de résidus d’antibiotiques. En revanche un virage coloré a été observé pour 685 échantillons (90,13 %) qui ont été déclarés négatifs. Il a été impossible de tirer une conclusion pour deux échantillons qui ont été considérés comme douteux (tableau 3). Mise en Évidence De Résidus d’Antibiotiques Dans le Lait de Vache Produit Dans l’Algérois Tableau 3: Résultats du Test d’acifidication pour les wilayas d’Alger et de Boumerdes
Epreuve d’acidification
Négatif Douteux Positif

3.2. Résultats du Test de Confirmation de Diffusion en Gélose
Sur les 760 échantillons de lait testés avec les deux souches de B. stearothermophilus et B. subtilis, 75 échantillons (9,86 %) se sont révélés positifs. Soixante treize (73) d’entre eux ont présenté une zone d’inhibition annulaire de B. stearothermophilus avec un diamètre supérieur à 12,50 mm ± 1,34 mm. Ces échantillons ont été par conséquent considérés comme positifs pour les résidus de pénicilline et / ou de tétracycline. Seuls deux (2) échantillons sur les 760 testés se sont révélés positifs pour les résidus de macrolides et / ou d’aminosides en induisant une inhibition circulaire de 10,50 mm ± 0,71 mm des colonies de B. subtilis. Sur les 75 échantillons trouvés positifs aux résidus d’antibiotiques, un pourcentage de 2,67 % l’était pour les macrolides et/ou les aminosides. La majorité écrasante des échantillons soit 97,33 %
était positive pour les pénicillines et/ ou les tétracyclines (tableau 4).
Tableau 4: Résultats de l’épreuve de confirmation par diffusion en gélose pour les wilayas d’Alger et
Echantillons positifs
Wilaya Nombre
d’échantillons
B. stearothermophilus
B. subtilis

4. Discussion
Le test d’acidification a permis dans un premier temps d’effectuer un premier screening de l’ensemble
des échantillons de lait prélevés et, de rendre un résultat positif pour 73 échantillons sur un total de 600
échantillons collectés dans la wilaya de Boumerdes soit un pourcentage de 12,16 % d’échantillons
positifs . Ce test n’a pas permis en revanche de conclure définitivement pour deux échantillons qui ont
été classés douteux. L’analyse des échantillons prélevés au niveau de la wilaya d’Alger, n’a révélé
aucun échantillon positif aux résidus d’antibiotiques recherchés.
La technique de diffusion en gélose a permis de confirmer la positivité des 73 échantillons précédents et de lever toute ambigüité sur les deux autres échantillons douteux, qui se sont révélés positifs par cette technique, ce qui a permis de ramener le taux de positivité dans la wilaya de Boumerdes à 12,5 %. Lors de l’épreuve de confirmation avec B. stearothermophilus, 99, 33 % des 75 échantillons positifs, ont présenté des zones d’inhibition annulaire supérieures à 12,50 mm ± 1,34 mm. Ces échantillons ont été considérés comme positifs pour les résidus de pénicilline et / ou tétracyclines. L’épreuve de confirmation avec B. subtilis n’a révélé que deux échantillons positifs aux macrolides et/ou aminosides soit un pourcentage de 2,67 %. Ces résultats ont confirmé la place prépondérante occupée par les pénicillines et les tétracyclines dans la thérapeutique en élevage laitier en Algérie. En effet, les résultats de l’enquête menée auprès des éleveurs ont révélé que deux spécialités d’intra-mammaires étaient essentiellement utilisées l’une contenait des tétracyclines et l’autre de la cloxacilline (résultats non publiés). La méthode microbiologique d’analyse mise en œuvre et utilisant notamment B. stearothermophilus comme micro-organisme test, se caractérise par un seuil de détection des antibiotiques au plus proche des limites maximales de résidus (LMR) des antibiotiques les plus Meriem-Hind Ben-Mahdi and Sabrine Ouslimani fréquemment utilisés dans le traitement des bovins laitiers tout en conservant un spectre d’antibiotique
large. En effet, la sensibilité de la nouvelle technique d’acidification est bien meilleure pour les deux
familles d’antibiotiques les plus largement retrouvées dans les spécialités d’intra-mammaires utilisées
en Algérie (beta-lactamines et tétracyclines). Bacillus stearothermophilus se caractérise en effet par
une sensibilité remarquable aux béta lactamines, sa croissance est inhibée par une concentration de 5
ppb d’ampicilline (Heeschen et al, 1991; Suhren and Heeschen, 1996). La sensibilité de cette technique
est particulièrement élevée pour la cloxacilline et relativement acceptable pour la tétracycline. La
technique d’acidification se caractérise ainsi par une sensibilité proche de la LMR pour la cloxacilline
et à 50-100% de la LMR pour la tétracycline comparée à l’ancienne méthode utilisant Streptococcus
thermophilus comme micro-organisme test qui n’offre pour les deux antibiotiques précédemment cités
que des sensibilité respectives de 3 à 4 fois la LMR et de 2-4 fois la LMR (Geleta et al, 1984). Le
risque de faux négatif avec des laits à concentration en résidus d’antibiotiques très faible proche des
LMR est ainsi limité (Mitchell et al, , 1998). L’épreuve de confirmation quant à elle montre une grande
spécificité (Katz and Siewierski, 1995).
La présence de résidus d’antibiotiques outre les risques directs ou indirects relativement modérés qu’ils présentent pour le consommateur (Wal, 1979; Dewdney et al; 1991; Sullivan et al, 2001) peut se révéler un véritable fléau pour l’industrie de transformation du lait en produits laitiers, notamment pour la fabrication de fromages, de yaourts etc. Ces résidus peuvent en effet être à l’origine de l’inhibition totale ou partielle des phénomènes fermentaires d’origine bactérienne (Wright and Harold, 1960; Mitchell et al, 1998). A titre d’exemple, il a été montré que 0,1 et 0,05 unités/ml de résidus de pénicilline ralentissaient la production d’acide lactique induisant ainsi, outre la détérioration de la qualité du fromage produit (Whitehead and Lane, 1956), le développement possible de microorganismes pathogènes au cours du processus de maturation (Bergère and Lenoir, 2000). Ces conséquences technologiques dépendent essentiellement de la dose résiduelle d’inhibiteurs dans le lait collecté et la sensibilité des germes lactiques utilisés aux antibiotiques (Labie, 1981;
Mitchell et al, 1998). Il devient dès lors évident que les résidus inhibiteurs devraient constituer une
préoccupation constante des industriels de la filière laitière en Algérie, de par la dépréciation
qualitative et quantitative de la production laitière qu’ils induisent. Par conséquent, la mise en place
d’un système de contrôle régulier pour ne pas dire systématique du lait destiné à la transformation
devient dès lors nécessaire pour cette filière. Malgré son aspect qualitatif, la recherche de résidus
d’antibiotique par la technique microbiologique reste une technique simple à mettre en œuvre et peu
couteuse comparée aux techniques immunologiques et chromatographiques dont le cout
considérablement plus élevé ne permettrait certainement pas leur généralisation dans le cadre du
contrôle laitier en Algérie.

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Source: http://observatoire-algerie.ensa.dz/modules/Galilee/Depot/systeme1/table28/doc_28_326_109.pdf